¿Cómo funciona la prueba inmunoturbidimétrica de HbA1c?
La hemoglobina A1c (HbA1c) es uno de los biomarcadores más establecidos para la evaluación del estado glucémico a largo plazo. A diferencia de una medición puntual de glucosa, que refleja la concentración de glucosa en un momento determinado, la HbA1c proporciona información relacionada con la exposición glucémica durante los meses anteriores.
Para la medición de HbA1c pueden utilizarse diversos principios analíticos, entre ellos la cromatografía líquida de alta resolución por intercambio iónico (HPLC), la cromatografía de afinidad, la electroforesis capilar, los métodos enzimáticos y las técnicas basadas en inmunoensayos.
Entre estos enfoques, los ensayos inmunoturbidimétricos de HbA1c permiten medir HbA1c en analizadores automatizados de química clínica mediante la combinación de una reacción antígeno-anticuerpo con detección fotométrica.
Comprender cómo funciona este principio analítico y cómo factores como la calibración, la estandarización, la precisión y las interferencias pueden influir en el rendimiento del ensayo es importante al evaluar un método de HbA1c para el uso rutinario en el laboratorio.
¿Qué es la HbA1c?
La HbA1c se forma cuando la glucosa se une de manera irreversible a la hemoglobina.
El proceso comienza con la formación de una base de Schiff inestable, denominada en ocasiones pre-HbA1c o HbA1c lábil. Este intermediario puede disociarse o sufrir una reorganización de Amadori, formando una estructura cetoamina estable.
Como los eritrocitos circulan aproximadamente durante 120 días, la HbA1c refleja la exposición glucémica durante un periodo considerablemente más largo que una sola medición de glucosa plasmática. Sin embargo, no representa simplemente una media de 120 días, ya que la glucemia más reciente tiene una mayor influencia.
La HbA1c proporciona un índice de la glucemia media durante aproximadamente los 2–4 meses anteriores, lo que la convierte en un parámetro importante para la evaluación glucémica a largo plazo.
¿Por qué se mide la HbA1c?
La HbA1c se utiliza ampliamente en el diagnóstico y seguimiento de la diabetes mellitus. A diferencia de una medición puntual de glucosa en sangre, la HbA1c proporciona información sobre la exposición glucémica a más largo plazo.
Una consideración analítica importante es que la interpretación de la HbA1c depende de la relación entre la glicación y la vida útil normal de los eritrocitos. Las situaciones que alteran la supervivencia de los glóbulos rojos, determinadas variantes de hemoglobina y otros factores clínicos pueden afectar la relación entre el resultado de HbA1c y el estado glucémico real del paciente.
Por este motivo, los resultados de HbA1c deben interpretarse siempre dentro del contexto clínico y analítico adecuado.
¿Qué métodos se utilizan para medir la HbA1c?
La HbA1c puede medirse mediante distintos principios analíticos. Algunos métodos diferencian la hemoglobina glicada de la no glicada en función de diferencias de carga, mientras que otros se basan en diferencias estructurales.
| Método |
Principio analítico general |
| HPLC por intercambio iónico |
Separación basada principalmente en las diferencias de carga entre las fracciones de hemoglobina. |
| Inmunoturbidimetría |
Detección basada en anticuerpos combinada con aglutinación de partículas y medición fotométrica. |
| Cromatografía de afinidad |
Reconocimiento de características estructurales asociadas con la hemoglobina glicada. |
| Métodos enzimáticos |
Reacciones enzimáticas diseñadas para cuantificar la hemoglobina glicada. |
| Electroforesis capilar |
Separación de las fracciones de hemoglobina según su movilidad electroforética. |
Los métodos inmunoturbidimétricos son especialmente relevantes para los laboratorios que desean integrar la medición de HbA1c en un flujo de trabajo automatizado de química clínica.
¿Qué es una prueba inmunoturbidimétrica de HbA1c?
La inmunoturbidimetría es un enfoque analítico en el que una reacción antígeno-anticuerpo produce cambios de turbidez que pueden medirse fotométricamente.
En un ensayo inmunoturbidimétrico de HbA1c, los anticuerpos reconocen específicamente la hemoglobina glicada. La reacción genera aglutinación, lo que produce un cambio en la turbidez. El analizador mide este cambio de absorbancia y utiliza el sistema de calibración del ensayo para determinar el resultado de HbA1c.
Principio inmunoturbidimétrico:
reconocimiento específico antígeno-anticuerpo → aglutinación de partículas → medición fotométrica
¿Cómo funciona el método inmunoturbidimétrico de HbA1c?
Aunque el diseño exacto de la reacción puede variar entre fabricantes, un ensayo inmunoturbidimétrico de HbA1c potenciado con partículas puede entenderse mediante varias etapas analíticas.
1
Sangre total
2
Hemólisis
3
Interacción con látex
4
Reacción de anticuerpos
5
Aglutinación
6
Detección fotométrica
1. Preparación y hemólisis de la muestra de sangre total
La HbA1c se mide en sangre total porque el analito se encuentra dentro de los eritrocitos. Por ello, los eritrocitos deben lisarse para liberar la hemoglobina antes de que tenga lugar la reacción analítica.
Para Archem HbA1c II DIRECT, el tipo de muestra recomendado es sangre total venosa humana anticoagulada, con K2-EDTA o K3-EDTA como anticoagulantes recomendados.
2. Interacción con partículas de látex
En el principio del ensayo Archem, la hemoglobina total y la HbA1c interactúan con partículas de látex. Estas partículas proporcionan una superficie sobre la que puede producirse la posterior reacción inmunoquímica.
3. Reacción con anticuerpos específicos para HbA1c
Se introduce en la reacción un anticuerpo dirigido contra la HbA1c. Una consideración analítica especialmente importante es la distinción entre HbA1c estable y HbA1c lábil.
En Archem HbA1c II DIRECT, el anticuerpo está diseñado para no presentar reactividad cruzada con la HbA1c lábil y ser específico para la forma cetoamina estable de HbA1c.
4. Aglutinación
La reacción del anticuerpo provoca la aglutinación de los complejos látex-HbA1c. A medida que se forman los complejos, cambian las propiedades ópticas de la mezcla de reacción. La cantidad de aglutinación está relacionada con la cantidad de HbA1c asociada a la superficie de las partículas de látex.
5. Medición fotométrica
La turbidez generada por la aglutinación se mide como un cambio en la absorbancia.
Para Archem HbA1c II DIRECT, la reacción se mide a 660 nm, mientras que 800 nm se especifica para aplicaciones de doble longitud de onda.
El sistema analítico expresa finalmente la HbA1c en relación con la hemoglobina total.
¿Cómo se estandarizan y reportan los resultados de HbA1c?
Una medición fiable de HbA1c requiere más que una reacción analítica adecuada. Los resultados generados por distintos sistemas de laboratorio también deben estar vinculados a sistemas de referencia establecidos.
Dos sistemas son especialmente importantes: NGSP e IFCC.
Reporte según NGSP
El sistema NGSP expresa los resultados de HbA1c como porcentaje. La estandarización NGSP vincula los resultados de HbA1c con la evidencia clínica establecida mediante el Diabetes Control and Complications Trial (DCCT).
Reporte según IFCC
El sistema de referencia IFCC proporciona un marco de medición de referencia basado en principios metrológicos. Los resultados IFCC se expresan en mmol/mol, mientras que los resultados NGSP suelen expresarse como % HbA1c.
NGSP (%) = 0.09148 × IFCC (mmol/mol) + 2.152
Por ejemplo, un valor aproximado de 7,0 % NGSP corresponde a 53 mmol/mol IFCC.
¿Qué deben considerar los laboratorios al evaluar un ensayo inmunoturbidimétrico de HbA1c?
La selección de un ensayo de HbA1c no depende únicamente del principio de medición. Los laboratorios también deben evaluar las características analíticas y operativas relevantes para la configuración de su analizador y su flujo de trabajo.
| Consideración analítica |
¿Por qué es importante? |
| Intervalo de medición |
Define el rango en el que el ensayo puede medir HbA1c con el rendimiento analítico previsto. |
| Precisión |
Indica la reproducibilidad de los resultados bajo condiciones de ensayo definidas. |
| Interferencias |
Permite evaluar si sustancias endógenas o exógenas pueden influir en el resultado. |
| Estabilidad de la calibración |
Influye en la eficiencia del flujo de trabajo y en la necesidad de recalibración. |
| Estabilidad de los reactivos |
Contribuye a la gestión de reactivos y al flujo de trabajo rutinario del laboratorio. |
| Aplicación en el analizador |
El rendimiento debe evaluarse para el analizador específico y la configuración de aplicación utilizada. |
| Estandarización |
Favorece la comparabilidad de los resultados de HbA1c entre laboratorios y sistemas de medición. |
Pruebas inmunoturbidimétricas de HbA1c en analizadores automatizados de química clínica
Una de las características prácticas del método inmunoturbidimétrico de HbA1c es su posibilidad de aplicación en plataformas automatizadas compatibles de química clínica.
Esto permite a los laboratorios integrar la medición de HbA1c en sus flujos de trabajo de química clínica existentes, sin necesidad de depender siempre de un analizador dedicado exclusivamente a HbA1c.
Para una aplicación específica de analizador, el rendimiento debe validarse adecuadamente y deben seguirse los parámetros de aplicación, los procedimientos de calibración y los requisitos de control de calidad especificados por el fabricante.
Archem HbA1c II DIRECT está destinado a la determinación cuantitativa in vitro de HbA1c en sangre total humana utilizando analizadores automatizados en entornos de laboratorio clínico.
Archem HbA1c II DIRECT
HbA1c II DIRECT es un ensayo de HbA1c líquido de doble reactivo desarrollado por Archem Diagnostics para su uso en analizadores automatizados compatibles de química clínica.
El ensayo utiliza un principio de medición inmunoturbidimétrico basado en partículas de látex y un anticuerpo monoclonal específico para HbA1c.
| Método |
Inmunoturbidimétrico |
| Muestra |
Sangre total venosa humana anticoagulada |
| Formato de reactivo |
Líquido, doble reactivo |
| Preparación |
Listo para usar |
| Intervalo de medición |
4,0–15,5 % HbA1c / 20–140 mmol/mol |
| Límite de detección |
2,7 % |
| Límite de cuantificación |
4,0 % |
| Estabilidad tras apertura |
30 días a 2–8°C en condiciones óptimas |
| Estabilidad de calibración |
30 días* |
| Reporte |
NGSP (%) / IFCC (mmol/mol) |
*La estabilidad de la calibración depende de las características de la aplicación y de la capacidad de refrigeración del analizador automático. La estabilidad del reactivo a bordo también depende de las características del analizador.
Trazabilidad NGSP en múltiples plataformas de química clínica
Archem ha completado con éxito la certificación de fabricante NGSP para sistemas de HbA1c en múltiples plataformas automatizadas de química clínica durante el periodo de certificación comprendido entre el 1 de mayo de 2026 y el 1 de mayo de 2027.
Los sistemas certificados son trazables al método de referencia del Diabetes Control and Complications Trial (DCCT), y las comparaciones se realizaron a través del European Reference Laboratory ESRL #13.
| Fabricante |
Plataforma certificada |
| Abbott |
Alinity C |
| Abbott |
ARCHITECT c4000 |
| Abbott |
ARCHITECT c8000 |
| Beckman Coulter |
DxC 700 AU |
| Olympus |
AU480 |
| Olympus |
AU5800 |
| Mindray |
BS2000M |
| Mindray |
BS800 / BS800M |
La certificación de fabricante NGSP se aplica al sistema analítico específico, a la configuración de reactivo/calibrador y a la instrumentación evaluada durante el proceso de certificación.
Preguntas frecuentes
¿Qué es un ensayo inmunoturbidimétrico de HbA1c?
Un ensayo inmunoturbidimétrico de HbA1c utiliza una reacción antígeno-anticuerpo para generar una turbidez medible. En los sistemas potenciados con partículas, la reacción inmunoquímica produce aglutinación, que se mide fotométricamente para determinar la HbA1c.
¿Puede medirse la HbA1c en un analizador automatizado de química clínica?
Sí. Los ensayos inmunoturbidimétricos de HbA1c pueden diseñarse para analizadores automatizados compatibles de química clínica. Deben considerarse los parámetros específicos de aplicación del analizador, la calibración, el control de calidad y el rendimiento validado.
¿Qué tipo de muestra se utiliza para la medición inmunoturbidimétrica de HbA1c?
La HbA1c se mide utilizando sangre total. Para Archem HbA1c II DIRECT se recomienda sangre total venosa humana anticoagulada, con K2-EDTA o K3-EDTA como anticoagulantes recomendados.
¿Cuál es la diferencia entre las unidades NGSP e IFCC para HbA1c?
Los resultados NGSP suelen expresarse como porcentaje (%), mientras que los resultados IFCC se expresan en mmol/mol. Ambos sistemas de reporte están relacionados mediante una ecuación de conversión establecida.
¿Por qué es importante la trazabilidad NGSP en los ensayos de HbA1c?
La estandarización NGSP vincula la medición de HbA1c con el sistema de referencia del DCCT y contribuye a la comparabilidad de resultados entre sistemas de medición de HbA1c correctamente estandarizados.
Conclusión
La medición inmunoturbidimétrica de HbA1c combina la especificidad de una reacción antígeno-anticuerpo con la detección fotométrica, lo que permite medir HbA1c en analizadores automatizados compatibles de química clínica.
Sin embargo, el principio de medición representa solo una parte del rendimiento del ensayo. La estandarización, la trazabilidad, la precisión, el intervalo de medición, las interferencias, la calibración, la estabilidad de los reactivos y el rendimiento específico del analizador contribuyen en conjunto a la fiabilidad de un sistema de medición de HbA1c.
Con HbA1c II DIRECT, Archem Diagnostics ofrece una solución inmunoturbidimétrica de HbA1c para plataformas automatizadas de química clínica, respaldada por características de rendimiento analítico definidas y certificación de fabricante NGSP en múltiples sistemas de análisis.
Referencias
- Archem Diagnostics. HbA1c II DIRECT, Instructions for Use. Rev. V3.6, julio de 2026.
- NGSP. National Glycohemoglobin Standardization Program. Recursos sobre estandarización de HbA1c y certificación de fabricantes.
- International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (IFCC). Sistema de medición de referencia de HbA1c.
- Diabetes Control and Complications Trial Research Group. Efecto del tratamiento intensivo de la diabetes sobre el desarrollo y progresión de complicaciones a largo plazo.
- Nathan DM, et al. Translating the hemoglobin A1c assay into estimated average glucose values. Diabetes Care.
- Sacks DB, et al. Guidelines and recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of diabetes mellitus.