Comment fonctionne le dosage immunoturbidimétrique de l’HbA1c ?

Comment fonctionne le dosage immunoturbidimétrique de l’HbA1c ?

L’hémoglobine A1c (HbA1c) est l’un des biomarqueurs les plus établis pour l’évaluation du statut glycémique à long terme. Contrairement à une mesure ponctuelle de la glycémie, qui reflète la concentration de glucose à un moment donné, l’HbA1c fournit des informations sur l’exposition glycémique au cours des mois précédents.

Plusieurs principes analytiques peuvent être utilisés pour mesurer l’HbA1c, notamment la chromatographie liquide haute performance par échange d’ions (HPLC), la chromatographie d’affinité, l’électrophorèse capillaire, les méthodes enzymatiques et les techniques fondées sur les immunoessais.

Parmi ces approches, les dosages immunoturbidimétriques de l’HbA1c permettent la mesure de l’HbA1c sur des analyseurs automatisés de biochimie clinique en associant une réaction antigène-anticorps à une détection photométrique.

Comprendre le fonctionnement de ce principe analytique, ainsi que l’influence de paramètres tels que l’étalonnage, la standardisation, la précision et les interférences, est essentiel lors de l’évaluation d’une méthode HbA1c destinée à une utilisation de routine en laboratoire.

Qu’est-ce que l’HbA1c ?

L’HbA1c se forme lorsque le glucose se lie de manière irréversible à l’hémoglobine.

Le processus débute par la formation d’une base de Schiff instable, parfois appelée pré-HbA1c ou HbA1c labile. Cet intermédiaire peut se dissocier ou subir un réarrangement d’Amadori, conduisant à la formation d’une structure cétoamine stable.

Les érythrocytes circulant pendant environ 120 jours, l’HbA1c reflète l’exposition glycémique sur une période nettement plus longue qu’une mesure unique de la glycémie plasmatique. Sa contribution est davantage pondérée par la glycémie récente et ne correspond donc pas à une simple moyenne sur 120 jours.

Pourquoi mesure-t-on l’HbA1c ?

L’HbA1c est largement utilisée pour le diagnostic et le suivi du diabète sucré. Contrairement à une mesure ponctuelle de la glycémie, elle fournit des informations sur l’exposition glycémique à plus long terme.

Un aspect analytique important est que l’interprétation de l’HbA1c dépend de la relation entre la glycation et la durée de vie normale des érythrocytes. Les situations modifiant la survie des globules rouges, certains variants de l’hémoglobine et d’autres facteurs cliniques peuvent influencer la relation entre le résultat d’HbA1c et le statut glycémique réel du patient.

Pour cette raison, les résultats d’HbA1c doivent toujours être interprétés dans leur contexte clinique et analytique approprié.

Quelles méthodes sont utilisées pour mesurer l’HbA1c ?

L’HbA1c peut être mesurée selon plusieurs principes analytiques. Certaines méthodes distinguent l’hémoglobine glyquée de l’hémoglobine non glyquée sur la base de différences de charge, tandis que d’autres reposent sur des différences structurelles.

Les méthodes immunoturbidimétriques sont particulièrement pertinentes pour les laboratoires souhaitant intégrer le dosage de l’HbA1c dans un flux de travail automatisé de biochimie clinique.

Qu’est-ce qu’un dosage immunoturbidimétrique de l’HbA1c ?

L’immunoturbidimétrie est une approche analytique dans laquelle une réaction antigène-anticorps provoque une variation de turbidité mesurable par photométrie.

Dans un dosage immunoturbidimétrique de l’HbA1c, les anticorps reconnaissent spécifiquement l’hémoglobine glyquée. La réaction entraîne une agglutination et donc une variation de turbidité. L’analyseur mesure cette variation d’absorbance et utilise le système d’étalonnage du dosage pour déterminer le résultat d’HbA1c.

Comment fonctionne la méthode immunoturbidimétrique de l’HbA1c ?

Bien que la conception précise de la réaction puisse varier selon les fabricants, un dosage immunoturbidimétrique de l’HbA1c renforcé par particules peut être décrit en plusieurs étapes analytiques.

1. Préparation et hémolyse de l’échantillon de sang total

L’HbA1c est mesurée dans le sang total, car l’analyte est contenu dans les érythrocytes. Ceux-ci doivent donc être lysés afin de libérer l’hémoglobine avant le début de la réaction analytique.

Pour Archem HbA1c II DIRECT, l’échantillon recommandé est du sang total veineux humain anticoagulé, avec le K2-EDTA ou le K3-EDTA comme anticoagulants recommandés.

2. Interaction avec les particules de latex

Dans le principe du dosage Archem, l’hémoglobine totale et l’HbA1c interagissent avec des particules de latex. Ces particules fournissent une surface sur laquelle la réaction immunochimique ultérieure peut se produire.

3. Réaction avec un anticorps spécifique de l’HbA1c

Un anticorps dirigé contre l’HbA1c est introduit dans la réaction. Une considération analytique importante est la distinction entre l’HbA1c stable et l’HbA1c labile.

Dans Archem HbA1c II DIRECT, l’anticorps est conçu pour ne pas présenter de réaction croisée avec l’HbA1c labile et pour être spécifique de la forme cétoamine stable de l’HbA1c.

4. Agglutination

La réaction avec l’anticorps entraîne l’agglutination des complexes latex-HbA1c. À mesure que les complexes se forment, les propriétés optiques du mélange réactionnel changent. Le degré d’agglutination est lié à la quantité d’HbA1c associée à la surface des particules de latex.

5. Mesure photométrique

La turbidité générée par l’agglutination est mesurée sous forme de variation d’absorbance.

Pour Archem HbA1c II DIRECT, la réaction est mesurée à 660 nm, avec une longueur d’onde de 800 nm spécifiée pour les applications à double longueur d’onde.

Le système analytique exprime finalement l’HbA1c par rapport à l’hémoglobine totale.

Comment les résultats d’HbA1c sont-ils standardisés et rapportés ?

Une mesure fiable de l’HbA1c nécessite plus qu’une réaction analytique appropriée. Les résultats produits par différents systèmes de laboratoire doivent également être reliés à des systèmes de référence établis.

Deux systèmes sont particulièrement importants : NGSP et IFCC.

Rapport selon le NGSP

Le système NGSP exprime les résultats d’HbA1c en pourcentage. La standardisation NGSP relie les résultats d’HbA1c à la base de données clinique établie par le Diabetes Control and Complications Trial (DCCT).

Rapport selon l’IFCC

Le système de référence IFCC fournit un cadre métrologique de référence pour la mesure de l’HbA1c. Les résultats IFCC sont exprimés en mmol/mol, tandis que les résultats NGSP sont généralement exprimés en % HbA1c.

Par exemple, une valeur d’HbA1c d’environ 7,0 % NGSP correspond à 53 mmol/mol IFCC.

Quels critères un laboratoire doit-il considérer lors de l’évaluation d’un dosage immunoturbidimétrique de l’HbA1c ?

Le choix d’un dosage d’HbA1c ne repose pas uniquement sur le principe de mesure. Les laboratoires doivent également évaluer les caractéristiques analytiques et opérationnelles pertinentes pour leur configuration d’analyseur et leur flux de travail.

Dosage immunoturbidimétrique de l’HbA1c sur les analyseurs automatisés de biochimie clinique

L’un des avantages pratiques de la méthode immunoturbidimétrique de l’HbA1c est sa capacité à être mise en œuvre sur des plateformes automatisées compatibles de biochimie clinique.

Cela permet aux laboratoires d’intégrer le dosage de l’HbA1c dans leur flux de travail de biochimie existant, sans devoir nécessairement utiliser un analyseur dédié exclusivement à l’HbA1c.

Pour une application spécifique à un analyseur, les performances doivent être correctement validées et les paramètres d’application, procédures d’étalonnage et exigences de contrôle qualité spécifiés par le fabricant doivent être respectés.

Archem HbA1c II DIRECT est destiné à la détermination quantitative in vitro de l’HbA1c dans le sang total humain à l’aide d’analyseurs automatisés en laboratoire clinique.

Archem HbA1c II DIRECT

HbA1c II DIRECT est un dosage HbA1c liquide à deux réactifs développé par Archem Diagnostics pour une utilisation sur des analyseurs automatisés compatibles de biochimie clinique.

Le dosage repose sur un principe immunoturbidimétrique utilisant des particules de latex et un anticorps monoclonal spécifique de l’HbA1c.

Méthode	Immunoturbidimétrique
Échantillon	Sang total veineux humain anticoagulé
Format du réactif	Liquide, deux réactifs
Préparation	Prêt à l’emploi
Intervalle de mesure	4,0–15,5 % HbA1c / 20–140 mmol/mol
Limite de détection	2,7 %
Limite de quantification	4,0 %
Stabilité après ouverture	30 jours à 2–8°C dans des conditions optimales
Stabilité de l’étalonnage	30 jours*
Rapport des résultats	NGSP (%) / IFCC (mmol/mol)

*La stabilité de l’étalonnage dépend des caractéristiques de l’application et de la capacité de refroidissement de l’analyseur automatique. La stabilité des réactifs à bord dépend également des caractéristiques de l’analyseur.

Traçabilité NGSP sur plusieurs plateformes de biochimie

Archem a obtenu avec succès la certification fabricant NGSP pour ses systèmes HbA1c sur plusieurs plateformes automatisées de biochimie clinique pour la période de certification du 1er mai 2026 au 1er mai 2027.

Les systèmes certifiés sont traçables à la méthode de référence du Diabetes Control and Complications Trial (DCCT), les comparaisons ayant été réalisées par le laboratoire de référence européen ESRL #13.

Fabricant	Plateforme certifiée
Abbott	Alinity C
Abbott	ARCHITECT c4000
Abbott	ARCHITECT c8000
Beckman Coulter	DxC 700 AU
Olympus	AU480
Olympus	AU5800
Mindray	BS2000M
Mindray	BS800 / BS800M

La certification fabricant NGSP s’applique au système analytique spécifique, à la configuration réactif/étalon et à l’instrumentation évalués au cours du processus de certification.

Abbott Alinity C

ARCHITECT c4000

ARCHITECT c8000

DxC 700 AU

Olympus AU480

Olympus AU5800

Mindray BS2000M

Mindray BS800 / BS800M

Questions fréquentes

Conclusion

Le dosage immunoturbidimétrique de l’HbA1c associe la spécificité d’une réaction antigène-anticorps à une détection photométrique, permettant ainsi la mesure de l’HbA1c sur des analyseurs automatisés compatibles de biochimie clinique.

Toutefois, le principe de mesure ne constitue qu’un élément de la performance d’un dosage. La standardisation, la traçabilité, la précision, l’intervalle de mesure, les interférences, l’étalonnage, la stabilité des réactifs et les performances spécifiques à l’analyseur contribuent tous à la fiabilité d’un système de dosage de l’HbA1c.

Avec HbA1c II DIRECT, Archem Diagnostics propose une solution immunoturbidimétrique de dosage de l’HbA1c pour les plateformes automatisées de biochimie clinique, soutenue par des caractéristiques analytiques définies et par une certification fabricant NGSP sur plusieurs systèmes d’analyse.